自己我进入实验室开始,我听到最多的就是,来来帮我看下,我的细胞好像又污染了,该怎么办啊!借此,今天我们讨论下怎么看细胞污染了,污染了该怎么办?我们不求全面分析,只对一些常见污染进行诊断分析。
细菌污染:这个是最容易区分的,培养液变黄,浑浊基本断定细胞重度污染,并且在显微镜下用40X物镜你就能发现有那种可以动的小黑点。另外还有白色念球菌、葡萄球菌等等,发几个案例:
看到这种,别犹豫了你的细胞被污染了,那么怎么办呢,基本原则立马扔掉,别扩大污染,如果你的细胞真的十分宝贵,先用带有双抗的PBS反复冲洗几遍,然后再培养液总加入硫酸庆大霉素、新霉素(50ug/ml)等,培养3天后换成带有双抗的培养液培养。
真菌污染:比较常见的是霉菌污染,这种污染培养液依旧清亮,只是会发现细胞状态下,并且可以在显微镜下发现有如下的菌丝存在。如果培养液中出现无来源的丝状物,恭喜你中招了。有这样的,
还有这样的:
这种也是:
真菌污染真的不建议处理,因为孢子容易飘散,可能这瓶没9过来,又扩大了污染,建议预防为主,在培养箱的水中加入硫酸铜,就是蓝色的那种东西。哎,如果你非救不可,可以采用两性霉素B(0.25-2.5),三天后换液加入含PS的培养液。
支原体污染:这个可以说是最常见的,国产血清可能都存在这玩意,这种污染很难发现,染个hochest你可以发现它的存在,因为它有DNA吗。看图:
对于这种污染,难发现,一般如果你的细胞没来由的就生长不好了,可以染个hochest看看哦。处理方法,一般用50℃处理就5h可以。另外你可以将细胞注射到小鼠腹腔弄死它,当然加巨噬细胞也可以,我估计你搞不定。
其实污染的种类还有很多,为了让你们看的不太累了,就搞这么多咯。其实预防为主,在培养液中加入双抗,生物安全柜别放太多东西,进入生物安全柜的东西要无菌。细胞培养箱加入硫酸铜。
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